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Elisa尝试演讲

更新时间:2019-08-07    点击次数:

 

  Elisa 尝试演讲 尝试名称: 酶联免疫吸附剂测定 尝试道理: 酶联免疫吸附测定是一种免疫测定手艺。测定中,先使抗原吸附正在固相载体上,然后加待 测的抗体,再用某种酶标识表记标帜抗体,构成抗原-抗体-酶标识表记标帜抗体的“双抗体夹心”,此时酶仍 保有活性,同时标识表记标帜抗体亦有免疫活性。之后再插手酶的底物,正在酶的催化下发生反映并产 生有色物,颜色深浅取待测物质的量间接相关。至此,酶的催化放大感化取免疫反映的 性相完满连系,提高了测定的精确性取活络度。 尝试材料取试剂: 1.聚苯乙烯微量细胞培育板(平板, 96 孔)。 2.酶联免疫检测仪。 3.辣根过氧化物酶羊抗兔 IgG。 4.包被液:0.05 mol/L 碳酸缓冲液(pH 9.6): Na2CO3 0.15g, NaHCO3 0.293g, 蒸馏水稀释至 100 ml。 5.稀释液(PBS-Tween): NaCl 8g, KCl 0.2g, KH2PO4 0.2g, Na2HPO4·12H2O 2.9g, Tween-20,0.5ml, 蒸馏水加至 1000ml。 6.洗涤液:同稀释液。 7.封锁液:0.5 % (质量分数)BSA(用 PBS 配制)。 8.邻苯二胺溶液(底物): 配制: 0.1 mol/L 柠檬酸 (2.1g/100ml), 取 6.1ml, 0.2 mol/L Na2HPO4·12H2O (7.163g/100ml), 取 6.4ml, 加蒸馏水 12.5ml, 取邻苯二胺 8mg(消融); 临用前加 30 % (体积分数)H2O2 40μ l。 9.终止液:2 mol/L H2SO4。 尝试步调: 1.包被抗原: 用包被液将抗原做恰当稀释, 一般为 1~10μ g/孔,每孔加 200μ l, 37 ℃温 育 30min。 2.洗涤:倒尽板孔中液体,加 200μ l 洗涤液,频频三次,最初将反映板倒置正在吸水纸上, 使孔中洗涤液流尽。 3.加封锁液 200μ l,37 ℃温育 30min。 4.洗涤同 2。 5.加被检血清: 用稀释液将被检血清做几种稀释,每孔 200μ l。同时做稀释液对照。37 ℃ 温育 30min。 6.洗涤同 2。 7.加辣根过氧化物酶羊抗兔 IgG, 每孔 200μ l, 37 ℃温育 30min。 8.洗涤同 2。 9.加底物:邻苯二胺溶液加 200μ l,室温暗处 5min。 10.加终止液:每孔 50μ l。 11.察看成果:用酶联免疫检测仪记实 OD490nm 读数。 尝试成果 数据如下: 血清稀释倍数 1/400 样本号 (组号) (2) 1/800 (3) 1/1600 1/3200 1/6400 1/12800 1/25600 1/51200 无 1 抗 (4) (5) (6) (7) (8) (9) (10) 无抗原 (11) B C D 组平均 1.408 1.098 1.494 1.333 1.240 1.357 1.354 1.317 OD490nm平均读数 1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 1/400(2) 1.211 0.943 1.240 1.131 1/800(3) 1.228 0.996 1.334 1.186 1.114 1.019 1.118 1.084 0.810 0.895 0.859 0.854 0.698 0.519 0.374 0.682 0.415 0.201 0.667 0.472 0.281 0.682 0.419 0.285 P.S: 紫色数据暗示非常 尝试成果折线) 1/6400(6) 1/12800(7) 1/25600(8) 1/51200(9) 无1抗(10) 无抗原(11) 稀释度(组号) 尝试会商: 1 无一抗(10)数据值存正在非常。理论上应趋近于零。可能是因为受污染所致 尝试现象比力清晰,随浓度由浓到稀,颜色由深黄渐变为浅黄。 2 线性关系比力较着。但斜率随浓度减小而有所增大。这可能是正在利用取液器时有气泡混 入,导致现实浓度低于理论上的浓度。 3 组号(2)(4)(5)中 3 个样本数据不同较大,可能是由于配血清时夹杂不敷平均所致。 这个尝试采用了间接法测定,操纵酶的催化放大感化提高了检测的活络度。做为一名精仪 系的学生,这赐与我的就是,正在间接丈量精度若是碰到瓶颈时,没有合适的方式提高精 度,那么能够考虑寻找一个“中介”,而这个“中介”该当具有“正在变量发生细小变化时能 放大这种变化,或者用另一种形式表现这种变化”的特征,从而丈量变得可行。而该尝试中, 最终结果就是我们能够间接通过颜色深浅大致看出浓度的分歧。这一点很值得思虑。 别的因为操做不熟练、不细心,也带来了一些粗大误差,如无一抗(10)。这是我们尝试 中该当避免的。